1. Cel: Niniejsza procedura ma na celu zapewnienie ustandaryzowanej procedury działań aseptycznych i ochrony sterylnych pomieszczeń.
2. Zakres zastosowania: laboratorium badań biologicznych
3. Osoba odpowiedzialna: Tester nadzorujący kontrolę jakości
4. Definicja: Brak
5. Środki ostrożności
Ściśle wykonywać czynności aseptyczne, aby zapobiec zanieczyszczeniu mikrobiologicznemu;operatorzy powinni wyłączyć lampę UV przed wejściem do sterylnego pomieszczenia.
6.Procedury
6.1.Pomieszczenie sterylne powinno być wyposażone w sterylną salę operacyjną i pomieszczenie buforowe.Czystość sterylnej sali operacyjnej powinna osiągnąć klasę 10000. W pomieszczeniu należy utrzymywać temperaturę 20-24°C, a wilgotność powietrza 45-60%.Czystość czystej ławki powinna osiągnąć klasę 100.
6.2.Pomieszczenie sterylne należy utrzymywać w czystości, bezwzględnie zabrania się gromadzenia gruzu, aby zapobiec zanieczyszczeniu.
6.3.Ściśle zapobiegać zanieczyszczeniu całego sprzętu do sterylizacji i pożywek hodowlanych.Osoby zakażone powinny zaprzestać ich używania.
6.4.Pomieszczenie sterylne powinno być wyposażone w środki dezynfekcyjne o roboczym stężeniu, takie jak 5% roztwór krezolu, 70% alkohol, 0,1% roztwór chlormetioniny itp.
6,5.Pomieszczenie sterylne powinno być regularnie sterylizowane i czyszczone odpowiednim środkiem dezynfekującym, aby czystość pomieszczenia sterylnego odpowiadała wymaganiom.
6.6.Wszystkie instrumenty, instrumenty, naczynia i inne przedmioty, które należy wnieść do sterylnego pomieszczenia, należy szczelnie owinąć i wysterylizować odpowiednimi metodami.
6.7.Przed wejściem do pomieszczenia sterylnego personel ma obowiązek umyć ręce mydłem lub środkiem dezynfekującym, a następnie przed wejściem do pomieszczenia sterylnego przebrać się w specjalną odzież roboczą, obuwie, nakrycie głowy, maseczkę i rękawiczki w pomieszczeniu buforowym (lub ponownie wytrzeć ręce 70% etanolem).Wykonuj operacje w komorze bakteryjnej.
6.8.Przed skorzystaniem ze sterylnego pomieszczenia należy włączyć lampę ultrafioletową w sterylnym pomieszczeniu w celu napromieniowania i sterylizacji na ponad 30 minut, a jednocześnie włączyć czysty stół w celu nadmuchu powietrza.Po zakończeniu operacji sterylne pomieszczenie należy w odpowiednim czasie oczyścić, a następnie sterylizować światłem ultrafioletowym przez 20 minut.
6.9.Przed kontrolą opakowanie zewnętrzne próbki do badań powinno pozostać nienaruszone i nie wolno go otwierać, aby zapobiec zanieczyszczeniu.Przed kontrolą należy użyć wacików z 70% alkoholem do dezynfekcji zewnętrznej powierzchni.
6.10.Podczas każdej operacji należy przeprowadzić kontrolę ujemną w celu sprawdzenia wiarygodności działania aseptycznego.
6.11.Podczas wchłaniania płynu bakteryjnego należy użyć kuli ssącej, aby go wchłonąć.Nie dotykaj słomki bezpośrednio ustami.
6.12.Igłę do inokulacji należy wysterylizować płomieniem przed i po każdym użyciu.Po ochłodzeniu kulturę można zaszczepić.
6.13.Słomki, probówki, szalki Petriego i inne przybory zawierające płyn bakteryjny należy namoczyć w wiadrze sterylizacyjnym zawierającym 5% roztwór lizolu do dezynfekcji, a następnie wyjąć i wypłukać po 24 godzinach.
6.14.W przypadku rozlania płynu bakteryjnego na stół lub podłogę należy natychmiast polać zanieczyszczoną powierzchnię 5% roztworem kwasu karbolowego lub 3% Lysolem na co najmniej 30 minut przed zabiegiem.W przypadku skażenia odzieży roboczej i nakrycia głowy płynem bakteryjnym należy je natychmiast zdjąć i wyprać po sterylizacji parą wysokociśnieniową.
6.15.Wszystkie przedmioty zawierające żywe bakterie należy zdezynfekować przed spłukaniem pod kranem.Surowo zabrania się zanieczyszczania ścieków.
6.16.Liczbę kolonii w sterylnym pomieszczeniu należy sprawdzać co miesiąc.Przy otwartym czystym stole pobrać kilka sterylnych szalek Petriego o średnicy wewnętrznej 90 mm i w sposób aseptyczny wstrzyknąć około 15 ml odżywczego podłoża agarowego, które zostało stopione i schłodzone do temperatury około 45°C.Po zestaleniu umieścić do góry nogami w temperaturze 30 do 35. Inkubować przez 48 godzin w inkubatorze o temperaturze ℃.Po sprawdzeniu sterylności należy pobrać od 3 do 5 płytek i umieścić je po lewej, środkowej i prawej stronie pozycji roboczej.Po otwarciu pokrywy i wystawieniu na 30 minut należy je umieścić do góry nogami w inkubatorze o temperaturze 30–35°C na 48 godzin i wyjąć.zbadać.Średnia liczba różnych bakterii na płytce w pomieszczeniu czystym klasy 100 nie może przekraczać 1 kolonii, a średnia liczba w pomieszczeniu czystym klasy 10000 nie może przekraczać 3 kolonii.W przypadku przekroczenia limitu należy dokładnie zdezynfekować pomieszczenie sterylne do czasu spełnienia wymagań przez kolejne kontrole.
7. Patrz rozdział (Metoda kontroli sterylności) w częściach „Metody kontroli higieny leków” i „Chińskie standardowe praktyki operacyjne dotyczące kontroli leków”.
8. Dział Dystrybucji: Dział Zarządzania Jakością
Wskazówki techniczne dotyczące pomieszczeń czystych:
Po uzyskaniu sterylnego środowiska i sterylnych materiałów musimy utrzymać sterylny stan, aby móc zbadać konkretny znany mikroorganizm lub wykorzystać jego funkcje.W przeciwnym razie różne mikroorganizmy z zewnątrz mogą łatwo się zmieszać. Zjawisko mieszania się nieistotnych mikroorganizmów z zewnątrz nazywane jest w mikrobiologii bakteriami zanieczyszczającymi.Zapobieganie zanieczyszczeniom jest kluczową techniką w pracy mikrobiologicznej.Całkowita sterylizacja z jednej strony i zapobieganie zanieczyszczeniom z drugiej to dwa aspekty techniki aseptycznej.Ponadto musimy zapobiegać przedostawaniu się badanych mikroorganizmów, zwłaszcza patogennych lub genetycznie modyfikowanych, które nie występują w przyrodzie, z naszych eksperymentalnych pojemników do środowiska zewnętrznego.Do tych celów w mikrobiologii istnieje wiele środków.
Pomieszczenie sterylne to zazwyczaj małe pomieszczenie specjalnie przystosowane do laboratorium mikrobiologicznego.Można go zbudować z arkuszy i szkła.Powierzchnia nie powinna być zbyt duża, około 4-5 metrów kwadratowych, a wysokość powinna wynosić około 2,5 metra.Pomieszczenie buforowe należy ustawić poza pomieszczeniem sterylnym.Drzwi do pomieszczenia buforowego i drzwi do pomieszczenia sterylnego nie powinny być zwrócone w tę samą stronę, aby zapobiec przedostawaniu się różnych bakterii przez przepływ powietrza.Zarówno pomieszczenie sterylne, jak i pomieszczenie buforowe muszą być szczelne.Urządzenia wentylacyjne w pomieszczeniach zamkniętych muszą być wyposażone w urządzenia filtrujące powietrze.Podłoga i ściany sterylnego pomieszczenia muszą być gładkie, trudne do gromadzenia brudu i łatwe do czyszczenia.Powierzchnia robocza powinna być równa.Zarówno pomieszczenie sterylne, jak i pomieszczenie buforowe wyposażone są w lampy ultrafioletowe.Światła ultrafioletowe w sterylnym pomieszczeniu znajdują się w odległości 1 metra od powierzchni roboczej.Personel wchodzący do pomieszczenia sterylnego powinien mieć na sobie wysterylizowaną odzież i nakrycie głowy.
Obecnie sterylne pomieszczenia istnieją głównie w zakładach mikrobiologicznych, podczas gdy laboratoria ogólne korzystają z czystego stołu.Główną funkcją czystego stołu jest zastosowanie urządzenia z laminarnym przepływem powietrza w celu usunięcia różnych drobnych pyłów, w tym mikroorganizmów, z powierzchni roboczej.Urządzenie elektryczne umożliwia przepływ powietrza przez filtr hepa, a następnie przedostanie się do powierzchni roboczej, dzięki czemu powierzchnia robocza jest zawsze pod kontrolą przepływającego sterylnego powietrza.Co więcej, po stronie zewnętrznej znajduje się szybkobieżna kurtyna powietrzna, która zapobiega przedostawaniu się zewnętrznego powietrza bakteryjnego.
W miejscach o trudnych warunkach zamiast czystej ławki można zastosować również drewniane sterylne skrzynki.Sterylne pudełko ma prostą konstrukcję i jest łatwe do przenoszenia.Z przodu skrzynki znajdują się dwa otwory, które, gdy nie są używane, są blokowane przez drzwiczki typu push-pull.Podczas pracy możesz wyprostować ramiona.Górna część frontu wyposażona jest w szybę ułatwiającą obsługę wewnętrzną.Wewnątrz pudełka znajduje się lampa ultrafioletowa, a przybory kuchenne i bakterie można wkładać przez małe drzwiczki z boku.
Aseptyczne techniki operacyjne odgrywają obecnie nie tylko kluczową rolę w badaniach i zastosowaniach mikrobiologicznych, ale są również szeroko stosowane w wielu biotechnologiach.Na przykład technologia transgeniczna, technologia przeciwciał monoklonalnych itp.
Czas publikacji: 6 marca 2024 r