1. Cel: Niniejsza procedura ma na celu zapewnienie standaryzowanego sposobu postępowania w zakresie operacji aseptycznych i ochrony pomieszczeń sterylnych.
2. Zakres zastosowania: laboratorium badań biologicznych
3. Osoba odpowiedzialna: Nadzorca kontroli jakości
4. Definicja: Brak
5. Środki ostrożności
Należy wykonywać czynności ściśle aseptyczne, aby zapobiec skażeniu mikrobiologicznemu; operatorzy powinni wyłączyć lampę UV przed wejściem do sterylnego pomieszczenia.
6. Procedury
6.1. Pomieszczenie sterylne powinno być wyposażone w sterylną salę operacyjną i pomieszczenie buforowe. Czystość sterylnej sali operacyjnej powinna osiągnąć klasę 10000. Temperatura wewnątrz pomieszczenia powinna wynosić 20–24°C, a wilgotność 45–60%. Czystość stołu roboczego powinna osiągnąć klasę 100.
6.2. Pomieszczenie sterylne powinno być utrzymywane w czystości. Aby zapobiec zanieczyszczeniu, kategorycznie zabrania się gromadzenia śmieci.
6.3. Należy bezwzględnie zapobiegać zanieczyszczeniu wszelkiego sprzętu do sterylizacji i pożywek hodowlanych. Zanieczyszczone pożywki należy wycofać z użytku.
6.4. Pomieszczenie sterylne powinno być wyposażone w środki dezynfekujące o roboczym stężeniu, takie jak 5% roztwór krezolu, 70% alkohol, 0,1% roztwór chlormetioniny itp.
6.5. Pomieszczenie sterylne powinno być regularnie sterylizowane i czyszczone odpowiednim środkiem dezynfekującym, aby zapewnić, że czystość pomieszczenia sterylnego spełnia wymagania.
6.6. Wszystkie narzędzia, przyrządy, naczynia i inne przedmioty, które należy wnieść do pomieszczenia sterylnego, powinny być szczelnie owinięte i wysterylizowane odpowiednimi metodami.
6.7. Przed wejściem do pomieszczenia sterylnego personel musi umyć ręce mydłem lub środkiem dezynfekującym, a następnie w pomieszczeniu buforowym przebrać się w specjalną odzież roboczą, obuwie, nakrycie głowy, maskę i rękawiczki (lub ponownie przetrzeć ręce 70% etanolem) przed wejściem do pomieszczenia sterylnego. Czynności należy wykonywać w komorze bakteryjnej.
6.8. Przed użyciem pomieszczenia sterylnego, lampa ultrafioletowa w pomieszczeniu sterylnym musi być włączona w celu naświetlania i sterylizacji na ponad 30 minut, a stół roboczy musi być jednocześnie włączony w celu przedmuchania powietrzem. Po zakończeniu operacji pomieszczenie sterylne należy na czas oczyścić, a następnie wysterylizować światłem ultrafioletowym przez 20 minut.
6.9. Przed kontrolą opakowanie zewnętrzne próbki do badań powinno być nienaruszone i nie wolno go otwierać, aby zapobiec zanieczyszczeniu. Przed kontrolą należy zdezynfekować powierzchnię zewnętrzną wacikami nasączonymi 70% alkoholem.
6.10. Podczas każdej operacji należy wykonać kontrolę negatywną w celu sprawdzenia niezawodności operacji aseptycznych.
6.11. Podczas wchłaniania płynu bakteryjnego należy użyć ssawki. Nie dotykaj słomki bezpośrednio ustami.
6.12. Igłę do inokulacji należy sterylizować płomieniem przed i po każdym użyciu. Po ostygnięciu można przeprowadzić inokulację.
6.13. Słomki, probówki, szalki Petriego i inne naczynia zawierające płyn bakteryjny należy namoczyć w wiadrze sterylizacyjnym zawierającym 5% roztwór Lysolu do dezynfekcji, a następnie wyjąć i opłukać po 24 godzinach.
6.14. W przypadku rozlania płynu bakteryjnego na stole lub podłodze, należy natychmiast polać skażony obszar 5% roztworem kwasu karbolowego lub 3% lizolem przez co najmniej 30 minut przed przystąpieniem do jego czyszczenia. W przypadku skażenia odzieży roboczej i nakryć głowy płynem bakteryjnym, należy je natychmiast zdjąć i wyprać po sterylizacji parą wodną pod wysokim ciśnieniem.
6.15. Wszystkie przedmioty zawierające żywe bakterie muszą zostać zdezynfekowane przed spłukaniem pod bieżącą wodą. Zabrania się zanieczyszczania kanalizacji.
6.16. Liczbę kolonii w sterylnym pomieszczeniu należy sprawdzać co miesiąc. Przy otwartym czystym stole, weź kilka sterylnych szalek Petriego o średnicy wewnętrznej 90 mm i aseptycznie wstrzyknij około 15 ml roztopionego i schłodzonego do około 45°C podłoża hodowlanego z agarem odżywczym. Po zestaleniu, odwróć je do góry dnem w temperaturze 30–35°C. Inkubuj przez 48 godzin w inkubatorze o temperaturze ℃. Po sprawdzeniu sterylności, weź 3–5 płytek i umieść je po lewej, środkowej i prawej stronie stanowiska roboczego. Po otwarciu pokrywy i wystawieniu ich na działanie światła przez 30 minut, umieść je do góry dnem w inkubatorze o temperaturze 30–35°C na 48 godzin i wyjmij. Zbadaj. Średnia liczba różnorodnych bakterii na płytce w pomieszczeniu czystym klasy 100 nie powinna przekraczać 1 kolonii, a średnia liczba w pomieszczeniu czystym klasy 10000 nie powinna przekraczać 3 kolonii. W przypadku przekroczenia limitu, pomieszczenie sterylne należy poddać dokładnej dezynfekcji, aż do momentu, gdy kolejne kontrole potwierdzą wymagania.
7. Zapoznaj się z rozdziałem (Metoda kontroli sterylności) w dokumencie „Metody kontroli higieny leków” i „Chińskie standardowe praktyki operacyjne dotyczące kontroli leków”.
8. Dział Dystrybucji: Dział Zarządzania Jakością
Wskazówki techniczne dotyczące pomieszczeń czystych:
Po uzyskaniu sterylnego środowiska i sterylnych materiałów, musimy utrzymać stan sterylności, aby badać konkretny, znany mikroorganizm lub wykorzystać jego funkcje. W przeciwnym razie różne mikroorganizmy z zewnątrz mogą się łatwo zmieszać. Zjawisko mieszania się nieistotnych mikroorganizmów z zewnątrz nazywane jest w mikrobiologii bakteriami zanieczyszczającymi. Zapobieganie zanieczyszczeniom jest kluczową techniką w pracy mikrobiologicznej. Pełna sterylizacja z jednej strony i zapobieganie zanieczyszczeniom z drugiej to dwa aspekty techniki aseptycznej. Ponadto musimy zapobiegać przedostawaniu się badanych mikroorganizmów, zwłaszcza mikroorganizmów patogennych lub genetycznie modyfikowanych, które nie występują w naturze, z naszych pojemników eksperymentalnych do środowiska zewnętrznego. W tym celu w mikrobiologii stosuje się wiele środków.
Pomieszczenie sterylne to zazwyczaj małe pomieszczenie specjalnie urządzone w laboratorium mikrobiologicznym. Może być zbudowane z arkuszy i szkła. Powierzchnia nie powinna być zbyt duża, około 4-5 metrów kwadratowych, a wysokość powinna wynosić około 2,5 metra. Pomieszczenie buforowe powinno być ustawione na zewnątrz pomieszczenia sterylnego. Drzwi pomieszczenia buforowego i drzwi pomieszczenia sterylnego nie powinny być skierowane w tym samym kierunku, aby zapobiec przedostawaniu się różnych bakterii do wnętrza pomieszczenia. Zarówno pomieszczenie sterylne, jak i pomieszczenie buforowe muszą być szczelne. Wewnętrzny sprzęt wentylacyjny musi być wyposażony w urządzenia filtrujące powietrze. Podłoga i ściany pomieszczenia sterylnego muszą być gładkie, odporne na gromadzenie się brudu i łatwe do czyszczenia. Powierzchnia robocza powinna być wypoziomowana. Zarówno pomieszczenie sterylne, jak i pomieszczenie buforowe są wyposażone w lampy ultrafioletowe. Lampy ultrafioletowe w pomieszczeniu sterylnym znajdują się w odległości 1 metra od powierzchni roboczej. Personel wchodzący do pomieszczenia sterylnego powinien nosić wysterylizowaną odzież i nakrycia głowy.
Obecnie pomieszczenia sterylne znajdują się głównie w zakładach mikrobiologicznych, natomiast laboratoria ogólne korzystają ze stołu czystego. Główną funkcją stołu czystego jest laminarny przepływ powietrza, który usuwa z powierzchni roboczej różnego rodzaju drobne pyły, w tym mikroorganizmy. Urządzenie elektryczne przepuszcza powietrze przez filtr HEPA i wpuszcza je do powierzchni roboczej, dzięki czemu powierzchnia robocza jest zawsze pod kontrolą przepływu sterylnego powietrza. Ponadto, z boku, tuż przy ścianie, znajduje się szybkobieżna kurtyna powietrzna, która zapobiega przedostawaniu się powietrza bakteryjnego z zewnątrz.
W miejscach o trudnych warunkach, zamiast stołu roboczego można również użyć drewnianych pojemników sterylizacyjnych. Pojemnik sterylizacyjny ma prostą konstrukcję i jest łatwy w transporcie. Z przodu pojemnika znajdują się dwa otwory, które są blokowane drzwiczkami typu push-pull, gdy pojemnik nie jest używany. Podczas pracy można wyciągnąć ręce do środka. Górna część frontu jest przeszklona, aby ułatwić obsługę wnętrza. Wewnątrz pojemnika znajduje się lampa ultrafioletowa, a przez małe drzwiczki z boku można włożyć naczynia i bakterie.
Aseptyczne techniki operacyjne odgrywają obecnie kluczową rolę nie tylko w badaniach i zastosowaniach mikrobiologicznych, ale są również szeroko stosowane w wielu biotechnologiach, na przykład w technologii transgenicznej, technologii przeciwciał monoklonalnych itp.
Czas publikacji: 06-03-2024